חיידקים קומפטנטים
חיידקים קומפטנטים הם חיידקים שיכולים לעבור טרנספורמציה בקלות. לרוב, הכוונה היא לחיידקים שגודלו בתנאים מוגדרים מסוימים ועברו טיפול (למשל, על ידי החלפת מדיום הגידול שלהם בתמיסות שונות) שמגביר את חדירות הממברנה שלהם ל-DNA. כאשר מוסיפים DNA (ברוב המקרים, פלסמיד) לתמיסה בה הם נמצאים הוא נכנס לתוך תא החיידק. לעיתים, משתמשים באלקטרופורציה על מנת להגביר את חדירות הממברנה ובה בעת להניע את ה-DNA על מנת להגביר את יעילות הטרנספורמציה.
הכנת חיידקים קומפטנטים
[עריכת קוד מקור | עריכה]חיידקים קומפטנטים אפשר להכין, למשל, על ידי סרכוז תרבית חיידקים בפאזה לוגריתמית והרחפתם בתמיסת קרה עשירה ביוני סידן. לאחר ההרחפה החיידקים קומפטנטים למשך מספר דקות עד מספר שעות, אך ניתן לשמור אותם בהקפאה עמוקה לתקופות ארוכות יותר.
לאחר מכן החיידקים הקומפטנטיים יכולים לעבור טרנספורמציה. קיימות שיטות רבות לטרנספורמציה, אך השיטה הנפוצה ביותר היא טרנספורמציה כימית, משהים את החיידק הקומפטנטי בתמיסה עם הפלסמיד תוך שמירה על טמפרטורה נמוכה (קרובה לאפס מעלות צלזיוס) מעלים את הטמפרטורה כדי לגרום לממברנת התא להיות חדירה ולאפשר כניסת דנ"א. מחזירים את החיידק לטמפרטורה נמוכה כדי לאפשר ל-DNA להישמר בתוך תא החיידק[1]. אחרי שלב זה, החיידק מועבר למדיום גידול כדי לאפשר לו התאוששות מתהליך הטרנספורמציה, ומשם לצלחת גידול כדי לאפשר בידוד מושבות ובדיקת המצאות הדנ"א בתוך התא.
שימוש בחיידקים קומפטנטים
[עריכת קוד מקור | עריכה]המחקר המדעי בביולוגיה מולקולרית מושתת על החדרת והחסרת גנים בחיידקים ובאורגניזמים אחרים. במחקרים אלה משתמשים תדיר בחיידקים קומפטנטים. בנוסף, חיידקים שונים, ובעיקר Escherichia coli משמשים לייצור חלבונים שונים, חיידקיים ולא חיידקיים. לצורך כך, מחדירים את הגן המקודד לחלבון המבוקש על גבי פלסמיד ביטוי בעל פרומוטר חזק שיביא לשעתוק הגן ולתרגום ה-RNA לחלבון.
קישורים חיצוניים
[עריכת קוד מקור | עריכה]
הערות שוליים
[עריכת קוד מקור | עריכה]- ^ Competent cells, transformation, and other methods of DNA delivery (article), Khan Academy (באנגלית)